1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)
国内外研究情况:
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)属于原核生物(Procaryotic organism)细菌纲(Bacteria)芽胞杆菌科(Bacillaceae)芽胞杆菌属(Bacillm)的一种革兰氏阳性、杆状、可产生孢子的土壤细菌(喻子牛,1990)。其产生的伴孢晶体是一种与具有杀虫活性的蛋白质杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal protein,ICP)又称δ-内毒素(δ-endotoxin),其具有对害虫专一、高效,对非靶标生物安全等优点,在害虫防治领域中得到了广泛的应用(Schnepf et al.,1998;黄大昉等,2001)。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标与内容:
① 利用Bac-to-Bac系统构建病毒,对二化螟中肠蛋白碱性磷酸酯酶1进行表达;
② 利用原位免疫荧光定位方法分析二化螟中肠蛋白ALP1与Bt毒素Cry1Ac的结合性;
3. 研究的方法与方案
研究方法:
1. 构建ALP1-病毒表达系统
(1)利用PCR技术扩增二化螟中肠ALP1基因全长,并将目的基因与供体质粒连接;
4. 研究创新点
以二化螟为对象,通过实验来证明中肠蛋白碱性磷酸酯酶1是否是Bt毒素Cry1Ac的受体,是对公认的Bt毒素受体类型相关理论的有效补充和验证。
5. 研究计划与进展
2016.07-2016.08 掌握分子生物学基本实验操作技术与二化螟的饲养以及查阅相关文献资料。
2016.09-2016.12 提取二化螟中肠RNA、合成cDNA、设计引物以及构建重组病毒杆粒ALP1;制备病毒。
2017.01-2017.03 使用病毒感染细胞,将毒素Cry1Ac与其互作,进行结合性和功能性分析。
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