1. 研究目的与意义
凤凰衣为雉科动物家鸡GallusgallusdomesticusBrisson.的蛋壳内的干燥卵膜。成品为皱折状的薄膜，薄如纸，大小不一。外表面白色，内表面淡黄色，具棕色线样血丝，边缘不整齐，体轻，略有韧性，易破碎。微臭，味淡。
其性味淡，平。归肺经。具有养阴，清肺的功效。用于久咳咽痛，失音，瘰疬结核，溃疡不敛。
在现行的《江苏省中药饮片炮制规范》中对凤凰衣的记载比较粗略，这会给有关部门对凤凰衣在的生产、检验及临床应用过程中的监管带来很大的麻烦。与此同时，由于缺乏统一的质量标准，市场上凤凰衣的质量良莠不齐，这给患者造成了很大的困扰。因此为维护市场平衡，满足中药现代化的要求，亟需运用现代分析技术，完善和提高凤凰衣的质量标准。
2. 文献综述
凤凰衣的研究进展
摘 要
凤凰衣为雉科动物家鸡Gallusgallus domesticus Brisson.卵孵后蛋壳内的卵膜，全国各地均有生产。凤凰衣中主要的化学成分是蛋白质，还有一些多糖和无机类成分。凤凰衣在内科、外科中均有广泛的临床应用。另外，蛋壳膜蛋白的生物相容性制备的支架材料在外伤敷料、临床止血、控缓释给药等方面也有应用价值。为全面掌握凤凰衣的研究状况，了解凤凰衣的研究进展，为凤凰衣质量标准的研究提供相关资料，本文在查阅文献的基础上，对凤凰衣含量测定、水分测定、浸出物测定等方面的方法进行研究，选取更合理科学的方法完善和提高凤凰衣的质量标准。
关键词
凤凰衣；研究
1来源及产地
凤凰衣始载于《医学入门本草》[1]，是雉科动物家鸡卵孵后蛋壳内的卵膜，在全国各地均有生产。
2凤凰衣化学成分的研究
2.1有机类
2.1.1蛋白质
凤凰衣中的主要成分是蛋白质，其中研究表明胶原蛋白（大部分为I、V、X型）是蛋壳膜最基础的结构蛋白。TsaiWT[2]的研究表明鸡蛋壳膜中的蛋白质是一种以胶原蛋白、角蛋白、与黏多糖类相结合的复合蛋白质。WongM［3］在鸡蛋膜中发现，内层膜中较狭窄、精细的（直径0.6m）纤维中主要存在Ⅴ型胶原，外层膜中较大、较粗糙的（直径2.5m）纤维主要包含了Ⅰ型胶原，V、I型胶原之比约为1:100，而且V、I型胶原都被蛋白多糖（proteoglycan）包绕；除此之外Ⅹ型胶原遍及全膜。Hincke等［4］研究表明，溶解酵素（lysozyme）作为蛋壳膜和蛋壳基质的组成成分，可能也是一个结构蛋白，在禽类胚胎发育时期以可溶形式影响碳酸钙沉积。
除此之外还有锁链素（desmosine）和异锁链素（isodesmosine）[5]卵运铁蛋白（ovotransferrin）[6]，赖氨酰氧化酶（lysyloxidase）[7]。
2.1.2多糖
蛋壳内的多糖主要为透明质酸、硫酸软骨素硫酸皮肤素共聚体、糖醛酸（uronicacid）、唾液酸（sialicacid）、氨基己糖（hexosamines）。NakanoT[8]的研究表明鸡蛋壳含有糖醛酸（uronicacid）、唾液酸（sialicacid）；PicardJ[9]
的研究表明鸡蛋壳含有氨基葡萄糖（glucosamine）、己糖（hexoses）和海藻糖（fucose
）
等氨基己糖（hexosamines）。
2.2无机类
凤凰衣中的无机物有钙、镁、锶，而几乎不含铅、铝、镉、汞、碘［10］。
通过查阅文献发现，国内外对凤凰衣的研究较少。凤凰衣的主要成分是胶原蛋白和黏蛋白纤维，这两种的成分在改善骨关节炎患者的病症有一定作用。氨基葡萄糖、透明质酸、硫酸软骨素、胶原蛋白是膝关节软骨基质及关节液中相同或者相近的组成成分，可以改善骨关节炎患者的膝关节疼痛和僵硬的症状。这些有效活性成分证明了凤凰衣在骨科等方面的应用潜力，同时凤凰衣的其他成分也有待科研工作者的研究。
3药理研究
凤凰衣入肺经[11]，具有养阴清肺，敛疮，消翳，接骨的功效。主治久咳气喘，咽痛失音，淋巴结核，溃疡不敛，目生翳障，头目眩晕，创伤骨折。具体的药理作用和临床应用综述如下。
3.1骨科
治疗骨关节炎。
3.2中医内科
治疗胃、十二指肠溃疡、慢性咳嗽、习惯性流产。
3.3烧伤外科的应用
治疗轻度烧、烫伤。鲜鸡蛋内膜，含有溶菌酶，有消炎、杀菌作用。同时，鸡蛋内膜表面的蛋清黏性强、氨基酸含量高，可改善创面营养状况，利于上皮生长，促进创面愈合［12］。
3.4眼科
治疗目翳。
3.5耳鼻喉科
治疗鼓膜穿孔、鼻出血。
3.6护理换药
治疗溃疡期压疮。谢雍宁［13］用中药粉末及外敷凤凰衣治疗II度以上压疮。
3.7临床检验
检测葡萄糖含量。凤凰衣不溶于水、稳定性好，具有良好的生物相容性和分子渗透性，可用于临床血清样品中葡萄糖含量的检测[14]。
3.8其他医学方面
利用蛋壳膜蛋白的生物相容性制备的支架材料在外伤敷料、临床止血、控缓释给药[15]等方面也有应用价值。
凤凰衣在临床中可以外敷，亦可以内服，在内外科的应用都比较广泛。虽然
凤凰衣在临床上的应用比较广泛，但是凤凰衣的药理作用及作用机制还是不太明确。所以为真正完成鸡蛋膜变废为宝的任务，进一步发掘凤凰衣的药用价值，增大其药用适用性，还需要科研人员继续研究。
4凤凰衣的采收加工
一般春、秋时采收，取孵出小鸡后留下的蛋壳敲碎，然后把内膜剥去，洗净后阴干，筛去灰屑，备用[10]。
5含量测定
方法：凤凰衣中的主要成分是蛋白质，所以对凤凰衣的含量测定主要针对的成分是蛋白质。2015
版《中国药典》总结了以下六种测定蛋白质含量的方法。
方法 | 优点 | 缺点 | 适用范围 |
凯氏定氮法 | 用于所有的蛋白质分析中；操作简单；费用低；结果准确。 | 最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮；实验时间长；精度差，试剂有腐蚀性。 | 0.22.0mg氮的测定 |
福林酚法 | 灵敏度高；重复性好；颜色深；析光度大。 | 试剂配制麻烦；干扰物质多。 | 2025g |
双缩脲法 | 不同种类蛋白的差异小； 重复性、线性关系好。 | 灵敏度低，测定范围窄，样品需要量大。 | 110mg |
2,2'-联喹啉-4,二羧酸法 | 灵敏度较高 | 干扰物质多 | 80400g |
考马斯亮蓝法(Bradford法） | 灵敏度高；测定快速、简便；干扰物质少。 | 有较大的偏差；标准曲线也有轻微的非线性；干扰性大。 | 1200mg |
紫外-可见分光光度法 | 灵敏度高；仪器设备简单，操作简便、快速应用广泛。 | 准确度较差；干扰物质多。 | 适用于纯化蛋白质的检测 |
根据以上几种方法的优缺点对比，先取部分样品进行试验，验证各方法的适用性，根据试验结果选择凤凰衣中蛋白质的测定方法。
6鉴别
6.1性状鉴别
参照《江苏省中药饮片炮制规范》2002版对凤凰衣进行性状鉴别。
6.2显微鉴别
参照《中国药典》2015版第四部（通则2001）。
6.3薄层鉴别
鸡蛋壳膜中大部分成分为蛋白质，占总成分的90%[16]，而且含氨基酸的种类多、配比合理，其中脯氨酸Pro和谷氨酸Glu的含量较高[17]。由于未找到凤凰衣的薄层鉴别方法，所以可参照2015版《中国药典》第一部中地龙的薄层鉴别方法，将对照品及展开剂进行相应改动，照薄层色谱法（通则0502）进行试验。
7水分测定
由于凤凰衣中所含的挥发性物质较少，所以我们拟采用烘干法[18]对其进行水分测定。
8浸出物的测定
2015版《中国药典》第四部规定浸出物的测定分为冷浸法和热浸法[18]。我们将取部分样品，对着两种方法进行操作验证，从中选取适合凤凰衣质量标准的测定方法，以此确定凤凰衣的浸出物标准，进一步完善凤凰衣质量标准的制定。具体操作参见《中国药典》2015版第四部（通则2201）
9小结
凤凰衣是储备丰富的自然资源，具有多方面的药用功效。同时更是一种性能优异的、有巨大开发价值的天然生物材料。其可降解性、无毒副作用都符合中药可持续发展的主题及要求，在未来凤凰衣在医疗卫生、保健品、化妆品等行业将会具有很好的发展空间。与此同时，我国每年将数以百万吨的蛋壳无意义的处理掉，这会造成环境的污染及政府财政资源的浪费。所以对于凤凰衣质量标准的研究与制定，有利于进一步规范凤凰衣的市场。这需要各行业专业人士的共同努力，这样可以使之变废为宝，造福人民。
参考文献：
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[4]Hincke MT, Gautron J, Panheleux M, et al. Identification and localization of lysozyme as component of eggshell membranes and eggshell matrix [J]. MatrixBiol,2000,19（5）:443-53.
[5]Starcher BC, King GS. The presence of desmosine and isodesmosine in eggshell membrane protein［J].Connect Tissue,1980, 8（1）:53-55.
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[18]国家药典委员会,编.中华人民共和国药典[M].中国医药科技出版社, 2010.
3. 设计方案和技术路线
凰衣质量标准研究方案
1、收集全国道地产区的十批以上的凤凰衣。
2、名称
4. 工作计划
2016.1.7-2016.2.29查看相关文献资料。
2016.3.1-2016.3.31学习仪器的结构与相关操作。
2016.4.1-2016.4.15选择实验材料、试剂、设备。
5. 难点与创新点
凤凰衣的质量标准在现行的《江苏中药饮片炮制规范》上记载的较为粗略，所以进行凤凰衣质量标准的研究是对《江苏中药饮片炮制规范》的进一步补充完善，同时也是利用现代分析技术研究中药质量标准的探索，符合中药研究现代化的趋势，对凤凰衣的生产加工有积极的指导作用。
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