1. 研究目的与意义
内容：样品KGF-2分子量较大，借助大肠杆菌宿主残留BL21(DE3)蛋白酶联免疫分析试剂盒，采用双抗体夹心法测定KGF-2样品中大肠杆菌宿主残留蛋白的浓度，研究该方法的可行性。
意义：双抗体夹心法，属于非竞争结合测定，适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，它是检测抗原最常用的ELISA。
尝试采用这种方法测定KGF-2样品中大肠杆菌宿主残留蛋白的浓度，围绕上述问题的解决，则可建立该方法。
2. 文献综述
酶联免疫吸附实验概述王夏雷1,2（1.南京中医药大学翰林学院，江苏 泰州 225300；2.上海新生源医药集团有限公司，上海200120） 摘要：酶联免疫吸附测定（ELISA）技术是1971年由Engvall和Perlmann建立的一种生物活性物质微量测定技术，以其灵敏度高、特异性好等优点，在生命科学各领域得到广泛应用[1]。
本课题旨在采用一种双抗体夹心法检测KGF-2中大肠杆菌宿主残留蛋白的浓度，研究此方法的可行性。
关键词：酶联免疫吸附、微量测定、双抗体夹心法、KGF-2、大肠杆菌 1.酶联免疫分析方法［2-5］ 1971年Engvall和Perlamnn发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得从1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，逐渐成为蛋白检测中最为常用的一种方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测迅速和非放射性的优点，可以批量测定，便于放大应用。
3. 设计方案和技术路线
1. 标准品的稀释2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50ul，待测样品孔中先加样品稀释液40ul，然后再加待测样品10ul。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
4. 工作计划
2022.01-2022.02查阅相关文献，搜集资料，学习ELISA，掌握操作技能2022.03-2022.05完成开题报告，开展ELISA相关实验，测定大肠杆菌宿主残留蛋白的浓度，由于此法操作要求较高，可重复实验。
2022.05-2022.06写毕业论文
5. 难点与创新点
1.对于要测已知样品KGF-2中大肠杆菌宿主残留蛋白的浓度，提出用双抗体夹心法测定，研究此方法的可行性。
2.由于已知样品的浓度未知，所以样品稀释倍数未知，需要进行样品最适稀释倍数的条件摸索。
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