1. 研究目的与意义
抑郁症作为一种以持久的心情低落为主要临床特征的疾病，严重时会使患者出现自杀念头。
研究者在对抑郁症的研究过程中发现在患者的脑内的神经递质含量下降，这是抑郁症致病的重要机理。
中医药治疗抑郁症有着丰富的经验记载，开心散作为治疗抑郁症的第一张方剂，十分具有研究价值。
2. 文献综述
文献综述PC12细胞在神经生物学中的研究摘要： 对近些年PC12细胞在神经保护，神经分化与神经毒性方面的研究，以及中药关于PC12细胞的研究进行总结综述。
关键词： 神经保护；神经分化；神经毒性PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1、PC12细胞在神经保护中的研究1.1dFGEN对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤具有保护作用陶美皊，冯星通过对PC12细胞的培养，建立谷氨酸（Glu）诱导PC12细胞损伤模型，在普通光学显微镜观察细胞形态，测定细胞上清液中LDH活性，MTT法检测细胞增殖抑制率，PI染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率，测定细胞内超氧化物歧化醉(SOD)活力和丙二酸(MDA)的含量来考察7-二氟甲氧基-5，4-二轻基异黄酮(dFGEN)对Glu诱导PC12损伤的影响[1]。
3. 设计方案和技术路线
研究方案：1.PC12细胞的培养1.1 细胞来源：PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1.2 细胞培养：将细胞培养在含6%胎牛血清（FBS），6%马血清（HS），1%双抗(p/s) 4.5g/L DMEM培养基中，于37C、饱和湿度、7.5% C02浓度条件下培养，隔天换液，四天分盘。
1.3 细胞实验：1.3.1 加入不同比例的开心散提取物粉末给PC12细胞培养液中进行培养1.3.2 加入不同的开心散中各味药物的有效成分于PC12细胞培养液中进行培养1.3.3 加入较低量的神经生长因子NGF观察PC12细胞分化情况1.4 细胞收集：收集培养完成的细胞，除去细胞培养液，之后进行表达测定。
4. 工作计划
研究进度：2022年1月3日-1月20日：确定课题，查阅国内外有关PC12细胞的培养，神经递质的合成降解以及开心散抗抑郁研究的文献，进行材料的搜集与整理，准备所需要的开心散药物，有效成分，以及后续处理的生化试剂。
2022年1月21日-3月2日：初步设定实验方案，培养细胞，准备实验仪器和试剂，做好前期准备。
2022年3月3号-5月18日：进入实际操作阶段，首先提取细胞中的RNA和蛋白，转cDNA,上qPCR按照上述的实验流程做好实验，并且进行重复实验，确认结果的可靠性。
5. 难点与创新点
创新：现有的抑郁症的病理研究发现，单胺类神经递质失调是抑郁症的重要发病机理。
开心散能够提升神经递质的含量已有报道，但是其作用的具体物质基础不明，也无相应报道。
本研究通过对开心散中有效成分对神经递质合成降解的调控影响，可以弥补此方面研究的薄弱之处，获得开心散抗抑郁的物质基础，为开心散治疗抑郁症提供理论依据。
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