ROCK调控小鼠早期胚胎发育开题报告

 2023-02-12 04:34:37

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

小鼠胚胎发育是以从受精卵到囊胚各个发育阶段的一系列分裂为特征。

受精后,合子经过第一次卵裂进入由母体调控的二细胞期(Yurttas et al. 2010)。

在桑椹胚形成后,卵裂球分泌的液体在细胞间隙积聚,最后在胚胎中央形成囊胚腔,最后从透明带中孵化出并植入子宫,胚胎基因组随后开始被激活。

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2. 研究的基本内容和问题

我们的研究旨在证实ROCK对哺乳动物胚胎模型保守的作用并在小鼠胚胎早期发育中ROCK-LIMK 1/2-肌动蛋白通路可能调控细胞分裂及囊胚形成。

3. 研究的方法与方案

抗体及化学试剂家兔多克隆抗体-ROCK 抗体 来源:Santa Cruz(Santa Cruz, CA)Phalloidin-TRITC 及 Alexa Fluor 488, 594抗体 来源:Invitrogen (Carlsbad, CA).家兔单克隆抗体anti-p-LIMK1/2 来源:Santa Cruz(Santa Cruz, CA)Y-27632抑制剂 来源:Calbiochem (Darmstadt, Germany)受精卵获得与培养实验动物的护理与利用根据中国南京农业大学动物研究委员会指引完成。

小鼠饲养在温度可控暗度适宜的房间内:循环光照,普通饲喂,由中国南京农业大学实验动物单位管理。

胚泡完整的卵母细胞从6-8周龄ICR小鼠的卵巢中获取。

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4. 研究创新点

1.思路创新: 首先用免疫荧光检验法确定ROCK定位.然后在对照组加入ROCK特异性抑制剂Y-27632检测胚胎发育过程各个阶段的发育率确定抑制ROCK活性对小鼠早期胚胎发育的影响,最后通过荧光强度分析确定抑制ROCK活性对动蛋白表达的影响。

2.技术特色:利用激光共聚焦显微镜高分辨率,多重荧光,成像清晰等优点,使观察结果更清晰准确.

5. 研究计划与进展

2013.9-2013.12 1.在不同时期着色用免疫荧光检验法确定ROCK定位.2.研究抑制ROCK活性对小鼠早期胚胎发育的影响. 在对照组加入抑制剂后检测胚胎发育过程各个阶段的发育率.2014.1-2014.4 3.研究抑制ROCK活性对动蛋白表达的影响.在处理组小鼠胚胎发育过程中(2细胞与8细胞时期)加入抑制剂Y-27632后检测肌动蛋白的表达(包括肌动蛋白微丝荧光强度和肌动蛋白平均荧光强度)。

4.整理数据,撰写论文。

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