1. 研究目的与意义
内容：淋巴细胞活化基因-3（lymphocyte activation gene-3,LAG-3,CD233）是表达于效应T细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等细胞表面的一种膜蛋白分子，研究发现靶向LAG-3的抗体药物可通过阻断T细胞表面LAG-3分子与肿瘤细胞的结合，让T细胞重新获得细胞毒性，从而激活人体的免疫系统，起到抑制肿瘤的作用，可见阻断LAG-3的分子功能有可能成为治疗肿瘤的新方法。
本文涉及的抗人LAG-3单链抗体AL1是通过噬菌体展示技术筛选得到的与LAG-3有特异性结合的抗体分子，本文通过构建该抗体的表达载体，在宿主大肠杆菌中实现可溶性表达，并采用Ni离子亲和层析与分子排阻色谱法纯化得到高纯度的AL1蛋白，用于后续体内外抗肿瘤活性研究。
意义：LAG-3是目前二代免疫检查点受体中，临床数据较多、成药性相对确定的靶点，针对该靶点的抗体药物将来有较大的可能成为一款重要的抗肿瘤药物。
2. 文献综述
LAG-3分子与肿瘤免疫治疗的研究进展周旭成南京中医药大学翰林学院摘要：淋巴细胞活化基因-3（lymphocyte activation gene-3,LAG-3,CD223）是免疫球蛋白超家族的成员之一，是对淋巴细胞具有抑制作用的分子。
LAG-3定位于人12号染色体，与CD4具有密切关系。
研究发现猪LAG-3分子的结构和表达模式在哺乳动物物种中是共有的，并且可溶性的猪LAG-3对控制人-猪异种T细胞免疫反应有作用。
3. 设计方案和技术路线
1,单链抗体基因PCR扩增与酶切.2,构建pCANTAB-scfv表达载体.3,转化大肠杆菌TG1.4,阳性克隆筛选.5,基因测序得到阳性重组子.6,转化表达宿主HB2151，IPTG诱导表达、并优化表达条件.7,放大培养.8,两步法纯化单链抗体（镍离子亲和层析，分子筛）.9,目的蛋白的鉴定.10,与抗原的亲和力测定.
4. 工作计划
通过噬菌体展示技术，以人LAG-3的胞外区做诱饵，采用固相淘选方法，已筛选获得十余个具有至少一个不同氨基酸的LAG-3特异性结合单链抗体.
5. 难点与创新点
免疫检查点CTLA-4和PD-(L)1 抑制剂的研究，已在不同癌症类型中都展现了前所未有的临床活性，也迅速地改变了人们对肿瘤治疗的认知，但仍无法彻底摆脱耐药性所带来的桎梏。
所以国内外研究者试图通过联合作用其他靶点而克服这个问题。
其中LAG-3就是具有巨大潜力的靶点之一。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
