1. 研究目的与意义
1、毕业论文的内容通过基因合成的方法，获得人源蛋白的核酸序列；将合成的核酸序列插入瞬转表达质粒中，构建瞬转表达质粒；利用化转试剂将质粒导入哺乳动物细胞，目的蛋白被表达；通过亲和层析技术进行分离纯化。
2、毕业论文的意义为了项目的需要，需要自己制备人源的蛋白。
很多情况下，市场上没有符合要求的蛋白，需要自己制备。
2. 文献综述
综述：建立重组蛋白哺乳动物细胞表达平台 谢宗任近年来，重组蛋白药物，尤其单克隆抗体，在医疗应用及科学研究中的得到爆炸式发展[1]。
生产重组蛋白药物的经典方法是将外源基因插入宿主细胞系基因组中，筛选稳定细胞株持续稳定地表达重组蛋白。
但是建立稳定细胞系过程复杂，耗时费力，最短也要数月之久。
3. 设计方案和技术路线
1、质粒构建：首先，通过基因合成的方法，获得人源蛋白的抗原序列;通过双酶切的方法获得线性化的基因和线性化的载体，进行T4连接得到瞬转表达质粒；2、瞬转表达：培养293F细胞，使用瞬转表达质粒转染该细胞，转染后第三天补料，第六天离心收集蛋白上清；3、纯化：将样品用Ni-beads结合后，用不同浓度的咪唑溶液洗脱用SDS-PAGE电泳检测纯化后的样品，收集有蛋白的样品进行超波置换，溶液换成1PBS4、蛋白检测：取纯化后的蛋白进行SDS-PAGE检测，初步鉴定蛋白的含量和纯度将合成的抗原基因和线性化载体通过T4连接得到瞬转表达载体，使用瞬转表达质粒转染培养好的细胞，第六天离心收集蛋白表达的上清，检测通过纯化后的蛋白，初步鉴定是否是符合要求的蛋白。
4. 工作计划
2022年3月：查阅并整理文献资料2022年3月：完成开题报告2022年4月：质粒构建2022年4月：瞬转表达2022年5月：蛋白纯化2022年5月：SDS-PAGE检测目的蛋白2022年6月：完成毕业论文设计
5. 难点与创新点
利用瞬时转染将表达质粒转入宿主细胞周质，通过细胞质中游离态的质粒表达目的蛋白。
宿主细胞通常可在转染后的 2-14 天内持续表达重组蛋白，滴度可达数十毫克至数克每升。
通过哺乳动物细胞中重组蛋白瞬时表达技术(TGE)制备项目需求的蛋白。
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