1. 研究目的与意义
1.浒苔多糖含量测定的方法学研究:采用蒽酮-硫酸法测定浒苔中多糖总含量,考察硫酸显色剂使用浓度;以鼠李糖为标品,对蒽酮-硫酸法进行方法学考察,包括精密度、稳定性、线性关系、加样回收。
意义:为优化浒苔多糖的测定提供可靠依据。
2.以浒苔多糖得率、提取转移率、粗多糖含量为指标,通过单因素实验考察提取工艺参数;以糖含量、除杂率为指标,通过正交试验考察醇沉工艺参数。
2. 文献综述
浒苔多糖的提取纯化工艺研究进展朱宇超摘 要:浒苔是一种广泛分布于世界各海洋中的低值藻类植物,其多糖具有抗癌、抗氧化活性、抗病毒、保湿等活性,对医药工业发展具有极大价值。
浒苔多糖的提取有煎煮法,酶提取法,微波辅助提取法等,其中煎煮法较为常用。
再通过savager法、三氯乙酸法、离子交换柱层析法、凝胶过滤层析法等对其进行纯化。
3. 设计方案和技术路线
研究方案:提取工艺优选:设计单因素考察实验,以糖含量、多糖转移率、多糖得率为指标,考察加水量、提取时间、提取次数对提取效果的影响,优选最佳工艺参数。
2.醇沉工艺优选:设计正交试验,以糖含量、除杂率为指标,考察药物浓度、醇沉时间、醇沉终浓度对醇沉效果的影响,优选最佳工艺参数。
3.蛋白酶法除蛋白工艺优选:设计单因素试验,以除蛋白率、多糖保留率为指标,考察酶用量、药液浓度对除蛋白效果的影响,优选最佳工艺参数。
4. 工作计划
2022.1.1-1.25:查阅文献初步确定提取醇沉工艺相关水平选择;以文献为依据选择除蛋白工艺为酶解法;参考文献选择以DEAE阴离子交换树脂对除蛋白后多糖进行精制。
2022.2.13-2.18:以水提醇沉法制备粗多糖样品;2022.2.20-3.4:以蛋白酶法除蛋白,透析除小分子盐及氨基酸,考察不同种酶及酶解条件对除蛋白效果的影响。
2022.03-04:对脱蛋白后多糖进行分级纯化,使用AKTA purifier DEAE Sephardi Fast flow树脂将多糖组分进一步分离得到纯度更高的均一多糖组分。
5. 难点与创新点
以浒苔为研究对象,充分研究开发浒苔这一低值藻类植物的价值,同时减少其对海洋生物及环境的危害,是一种典型的变废为宝的研究,具有较好的研究前景。
查阅相关文献发现国内外对浒苔多糖的提取纯化工艺研究较少,所用工艺多繁琐耗时,提取效果差。
本次研究旨在通过更科学的研究方法优化浒苔多糖的提取纯化工艺,在提取得较多多糖的同时保证多糖的纯度,为更好的研究浒苔多糖的组分打下坚实的基础。
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