江苏沿海四种低值贝类软体中贝毒素类成分的动态积累规律研究开题报告

研究方案：

一．海洋贝类软体腹泻性贝毒素(DSP)含量测定方法研究

1.样品处理方法的考察：

提取溶剂的考察（甲醇、乙腈，不同比例的甲醇-水，乙腈-水，加酸量等）；提取方法的考察，提取时间的考察，溶剂用量的考察，固相萃取小柱的选择以及洗脱条件的考察。

2.色谱、质谱条件与系统适应性试验：（UFLC-MS/MS)

（1）色谱条件的考察：

色谱柱，柱温，流速以及流动相的考察。

（2）质谱条件的考察及优化：

离子源：ESI离子源，正负离子模式；检测方式：多重反应监测（MRM）；优化每个待测化合物离子对的DP，CE以及CXP值。

3.方法学考察：

a.标准曲线的制定：准确配制系列标准浓度的溶液，进LC-MS/MS分析，计算回归方程及相关系数；计算定量限、检测限。

b.精密度：日内精密度：在较短的时间间隔内，在相同的操作条件下，由同一分析人员平行测定样品溶液五次，要求RSD＜2%。日间精密度：由同一分析人员用同一设备在不同时间平行测定样品溶液五次，要求RSD＜2%。

c.稳定性：移取适量样品溶液进行预处理之后，每隔1h进样一次，观察测定时间对测定稳定性的影响，要求RSD＜5%。

d.重复性：分别取适量样品平行预处理六次之后，进HPLC分析，每个样品平行进两针，要求RSD＜5%。

e.加样回收：分别准确配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各3份，进HPLC分析，测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，要求95%~105%，RSD＜2%。

f.基质效应实验。

二.海洋贝类软体中麻痹性贝毒素（PSP)含量测定方法研究

1.样品前处理方法的考察：

提取溶剂的考察（甲醇、乙腈，不同比例的甲醇-水，乙腈-水，加酸量等）；提取方法的考察，提取时间的考察，溶剂用量的考察，固相萃取小柱的选择以及洗脱条件的考察。

2.色谱、质谱条件的考察

（1）色谱条件的考察：

色谱柱，柱温，流速以及流动相的考察。

（2）质谱条件的考察及优化：

离子源：ESI离子源，正负离子模式；检测方式：多重反应监测（MRM）；优化每个待测化合物离子对的DP，CE以及CXP值。

3.方法学考察：

a.标准曲线的制定：准确配制系列标准浓度的溶液，进LC-MS/MS分析，计算回归方程及相关系数；计算定量限、检测限。

b.精密度：日内精密度：在较短的时间间隔内，在相同的操作条件下，由同一分析人员平行测定样品溶液五次，要求RSD＜2%。日间精密度：由同一分析人员用同一设备在不同时间平行测定样品溶液五次，要求RSD＜2%。

c.稳定性：移取适量样品溶液进行预处理之后，每隔1h进样一次，观察测定时间对测定稳定性的影响，要求RSD＜5%。

d.重复性：分别取适量样品平行预处理六次之后，进HPLC分析，每个样品平行进两针，要求RSD＜5%。

e.加样回收：分别准确配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各3份，进HPLC分析，测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，要求95%~105%，RSD＜2%。

f.基质效应实验。

三.贝类软体的采收期研究

分别测定江苏地产青蛤、文蛤、杂色蛤及四角蛤蜊软体中贝毒素的含量，通过SPSS软件中ANOVA模块统计12个月份这两类型成分的动态积累规律。

技术路线：

2022年1月4日-2月10日：确定课题，查阅文献，文献综述，准备原材料；

2022年3月1日-3月15日：初步确定提取方案、分析方法以及色谱柱、流动相、柱温等色谱条件和质谱条件，准备实验仪器和试剂，做好前期准备；

2022年3月16号-5月18日：方法学考察以及含量测定；

2022年5月19日-6月10日：整理实验数据并进行数据分析，撰写论文。