1. 研究目的与意义
近年来国内外对于可再生生物质的利用研究日趋火热,木质素作为一种在自然界蕴含量第二大的绿色资源,由于其结构复杂性,降解难度大,成了植物材料有效利用的关键,因而对产木质素酶微生物的研究也更加具有现实性和紧迫性。
2. 文献综述
木质素酶及产生菌选育摘要:近年来国内外对于可再生生物质的利用研究日趋火热,木质素作为一种在自然界蕴含量第二大的绿色资源,由于其结构复杂性,降解难度大,成了植物材料有效利用的关键,本文从木质素降解酶的角度出发,对其定义、来源、特性、作用机制以及高产菌的选育等发面进行综述,结合近几年国内外最新研究成果,提出了寻找复合菌剂、针对本地植物种群寻找高产菌以及开发非真菌微生物三个未来潜力较大的研究方向,以期为将来致力于这方面研究的朋友提供一些帮助。
关键字:木质素降解木质素酶植物材料高效利用木质素是一类结构复杂、无定形三维空间结构的复合物,难溶于有机、无机溶剂,由苯酚和非苯酚结构单元通过醚键和碳碳键等连接而成,具有芳香族特性。
木质素广泛存在于自然界的高等植物体中,与纤维素、半纤维素一起构成了植物细胞壁的主要结构,约占植物体干重的20%左右,是除纤维素以外世界上第二大丰富的天然聚合物,全球每年可产生约 6l014吨[1]。
3. 设计方案和技术路线
菌株分离纯化分别称取5 g样品捣碎后,加入到装有50 mL 0. 9%生理盐水和少量玻璃珠并经高压灭菌后的三角瓶中,振荡均匀后,进行逐级梯度稀释.取0. 15~ 0. 2 mL经适当梯度稀释的样品溶液涂布于PDA分离平板上,于28℃培养4~ 5 d,挑取单一菌落划线培养于分离平板上,并通过反复平板划线进行分离纯化直至获得纯菌株;然后将纯菌株接种到PDA斜面培养基上,于28℃下恒温培养4 d后,放入4℃冰箱保存备用。
《B高效木质素降解菌株的分离筛选》愈创木酚培养基平板法(初筛)菌株初筛,将已经分离纯化并保存于冰箱中的菌株分别接种到GU-PDA培养基上,并作多个平行,于28℃恒温培养7 d,观察菌落颜色及形状变化;对产生变色圈的菌株分别测定其菌落圈和变色圈的直径,并计算其平均值。
GU-PDA平板培养基:于PDA培养基中加入0. 1%的愈创木酚。
4. 工作计划
样品采集初筛复筛活力测定数据分析
5. 难点与创新点
目前国内外在木质素酶的研究领域反应机制方面已经比较清楚,但大多数实验者仍在研究以黄孢原毛平革菌为代表的白腐菌,最近成果出众的研究结果已经显示在木质素降解处理这个问题上寻找复合菌剂、针对本地植物种群寻找高产菌以及开发非真菌微生物等都是潜力巨大的方向。
本课题立足于根据处理原料最终用途调整实验条件,使得实验中得到的实验结果能在生产实践中得到充分应用。
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